19 priedas

I. BENDROSIOS NUOSTATOS

1. Laisvojo formaldehido atpažinimas ir kiekio nustatymas nesant formaldehido donorų atliekamas pagal techninį reglamentą [3.6].

2. Kitais atvejais ir jeigu rezultatas viršija didžiausią leidžiamą koncentraciją, taikomas čia pateiktas kitas tyrimo metodas.

II. KIEKIO NUSTATYMAS ESANT FORMALDEHIDŲ DONORAMS

3. Laisvasis formaldehidas, jam reaguojant su pentan-2,4-dionu pokolonėlės reaktoriuje, yra paverčiamas geltonuoju lutidinų dariniu, o gautas darinio kiekis yra nustatomas matuojant spektrinę absorbciją, esant 420 nm bangos ilgiui.

4. Reagentai. Jie turi būti naudojami analiziškai gryni.

4.1. Didelio slėgio skysčių chromatografijos (HPLC) grynumo arba lygiavertės kokybės vanduo.

4.2. Bevandenis amonio acetatas.

4.3. Koncentruota acto rūgštis.

4.4. Pentan-2,4-dionas (laikomas 4oC temperatūroje).

4.5. Bevandenis dinatrio fosfatas.

4.6. 85% ortofosfato rūgštis (d = 1,7).

4.7. HPLC grynumo metanolis.

4.8. Dichlormetanas.

4.9. Formaldehidas, 37 – 40% m/t.

4.10. Natrio hidroksidas, 1 M.

4.11. Vandenilio chloridas, 1 M.

4.12. Vandenilio chloridas, 0,002 M.

4.13. Krakmolo tirpalas, šviežias.

4.14. Etaloninis jodo tirpalas, 0,05 M.

4.15. Etaloninis natrio tiosulfato tirpalas, 0,1 M.

4.16. Judančiosios fazės tirpalas – vandeninis dinatrio fosfato tirpalas (4.5), 0,006 M, kurio pH ties 2,1 yra nustatyta naudojant ortofosfato rūgštį (4.6).

4.17. Pokolonėlės reagentas – 1000 ml matavimo kolboje ištirpinama: – 62,5 g amonio acetato (4.2), 7,5 ml acto rūgšties (4.3), 5 ml pentan-2,4-diono (4.4). Pripilama iki 1000 ml vandens (4.1).

Šis reagentas laikomas tamsoje. Laikymo trukmė – daugiausia trys dienos 25°C temperatūroje. Spalva neturi pasikeisti.

4.18. Formaldehido etaloninis tirpalas – pradinis tirpalas: į 1000 ml matavimo kolbą įpilama 10 g formaldehido (4.9) ir skiedžiama iki 1000 ml vandeniu. Šio tirpalo koncentracija nustatoma taip: į 5,00 ml tirpalo įpilama 25,00 ml etaloninio jodo tirpalo (4.14) ir 10,00 ml natrio hidroksido tirpalo (4.10); leidžiama nusistovėti penkias minutes; parūgštinama įpilant 11,00 ml HCl (4.11) ir etaloninio jodo tirpalo perteklius titruojamas etaloniniu natrio tiosulfato tirpalu (4.15), indikatoriumi naudojant krakmolo tirpalą (4.13).

1 ml sunaudoto jodo tirpalo (4.14) atitinka 1,5 mg formaldehido.

4.19. Formaldehido etaloninis tirpalas – praskiestas tirpalas: pradinis tirpalas praskiedžiamas iki 1/100-osios dalies savo pradinės koncentracijos judančiosios fazės tirpalu (4.16). 1 ml šio tirpalo yra apie 37 mg formaldehido. Apskaičiuojamas tikslus kiekis.

5. Priemonės

5.1. Įprastos laboratorijos priemonės.

5.2. HPLC siurblys, be pulsacijos.

5.3. Žemo slėgio siurblys, be pulsacijos, skirtas reagentui (arba dar vienas HPLC siurblys).

5.4. Įšvirkštimo vožtuvas su 10 ml kilpa.

5.5. Pokolonėlės reaktorius su:

5.5.1. viena 1 litro trikaklė kolba,

5.5.2. vienas 1 litro kolbos šildytuvas,

5.5.3. dvi Vigreux kolonėlės su ne mažiau kaip 10 plokštelių, iš jų dvi – aušinamos oru,

5.5.4. nerūdijančio plieno 1,6-0,23 mm vidinio skersmens, 400 mm ilgio vamzdelis (šilumos mainams),

5.5.5. teflono vamzdelis, 1,6-0,30 mm vidinio skersmens, 5 m ilgio („prancūziškasis nėrimas“, IV skyrius),

5.5.6. T formos detalė be nenaudingojo tūrio (Valco arba jo atitikmuo),

5.5.7. trys elementai be nenaudingojo tūrio,

5.5.8. arba: vienas pokolonėlės modulis Applied Biosystems PCRS 520 arba jo atitikmuo, sujungtas su 1 ml reaktoriumi.

5.6. Membraninis filtras, kurio porų dydis – 0,45 mm.

5.7. SEP-PAK®C18 kasetė arba jos atitikmuo.

5.8. Paruoštos naudoti kolonėlės:

5.8.1. Bischoff hypersil RP 18 (NC tipas, 5 mm, 250 mm ilgio, 4,6 mm vidinio skersmens),

5.8.2. arba Dupont, Zorbax ODS (5 mm, 250 mm ilgio, 4,6 mm vidinio skersmens),

5.8.3. arba Phase SEP, spherisorb ODS 2 (5 mm, 250 mm ilgio, 4,6 mm vidinio skersmens).

5.9. Prieškolonėlė Bischoff K1 hypersil RP 18 (5 mm, 10 mm ilgio arba jo atitikmuo).

5.10. Kolonėlė arba prieškolonėlė, kuri yra sujungta naudojant Ecotube sistemą arba jos atitikmenį.

5.11. Aparatas (5.5), kuris surenkamas pagal 6 pav. Jungtys, esančios už įšvirkštimo vožtuvo, turi būti kaip galima trumpesnės. Tokiu atveju nerūdijančio plieno vamzdelis tarp reaktoriaus išėjimo angos ir detektoriaus įėjimo angos aušins mišinį prieš atliekant nustatymą, o temperatūra detektoriuje yra nežinoma, bet pastovi.

5.12. UV regimojo spektro detektorius.

5.13. Savirašis.

5.14. Centrifuga.

5.15. Ultragarso vonia.

5.16. Vibracinis maišytuvas (sūkurinis arba jo atitikmuo).

6. Darbo eiga

6.1. Kalibracinė kreivė

Ji yra sudaroma atidedant smailių aukščius kaip praskiesto etaloninio formaldehido tirpalo koncentracijos funkciją. Etaloniniai tirpalai paruošiami praskiedžiant formaldehido etaloninį tirpalą (4.19) judančiosios fazės tirpalu (4.16): 1,00 ml tirpalo (4.19) praskiedžiama iki 20,00 ml (apie 185 mg/100 ml); 2,00 ml tirpalo (4.19) praskiedžiama iki 20,00 ml (apie 370 mg/100 ml), 5,00 ml tirpalo (4.19) praskiedžiama iki 25,00 ml (apie 740 mg/100 ml); 5,00 ml tirpalo (4.19) praskiedžiama iki 20,00 ml (apie 925 mg/100 ml).

Etaloniniai tirpalai yra laikomi vieną valandą laboratorijos temperatūroje ir turi būti švieži. Kalibracinės kreivės tiesiškumas yra geras, esant koncentracijai tarp 1,00 ir 15,00 mg/ml.

6.2. Mėginių paruošimas

6.2.1. Emulsijos (kremai, makiažo pagrindas, pieštukai akių kontūrams paryškinti). Užkemšamoje 100 ml kolboje 0,001 g tikslumu pasveriamas mėginys (m gramų), atitinkantis tikėtiną 100 mg formaldehido kiekį. Įpilama tiksliai pamatuoto 20,00 ml dichlormetano (4.8) ir 20,00 ml vandenilio chlorido (4.12). Maišoma vibraciniu maišytuvu (5.16) ir ultragarso vonioje (5.15). Dvi fazės atskiriamos centrifuguojant (3000 gn dvi minutes). Patronas (5.7) perplaunamas su 2 ml metanolio (4.7), po to kondicionuojamas 5 ml vandens (4.1). 4 ml vandeninės ekstrakto fazės perleidžiama per kondicionuotą kasetę, pirmieji 2 ml išpilami, o kita frakcija regeneruojama.

6.2.2. Losjonai, šampūnai. Užkemšamoje 100 ml kolboje 0,001 g tikslumu pasveriamas mėginys (m gramų), atitinkantis tikėtiną 500 mg formaldehido kiekį. Pripilama iki 100 ml judančiosios fazės tirpalo (4.16). Tirpalas filtruojamas per filtrą (5.6) ir įšvirkščiamas arba perleidžiamas per kasetę (5.7), kuri kondicionuota kaip nurodyta pirmiau (6.2.1). Visi tirpalai turi būti įšvirkščiami tuoj po jų paruošimo.

6.3. Chromatografijos sąlygos

6.3.1. Judančiosios fazės srauto greitis – 1 ml/min., reagento srauto greitis – 0,5 ml/min., viso srauto greitis detektoriaus išleidimo angoje – 1,5 ml/min., įšvirkščiamas tūris – 10 ml.

6.3.2. Eliuavimo temperatūra: jeigu medžiagos yra sunkiai atskiriamos, kolonėlė panardinama į tirpstančio ledo vonią: laukiama, kol nusistovės temperatūra (15–20 min.). Pokolonėlės reakcijos temperatūra – 100°C, aptikimas – 420 nm.

6.3.3. Visa chromatografijos sistema ir pokolonėlė, atlikus darbą, turi būti skalaujamos vandeniu (4.1). Jeigu sistema nenaudojama ilgiau kaip dvi dienas, po skalavimo vandeniu turi būti skalaujama metanoliu (4.7). Prieš sistemos rekondicionavimą per ją leidžiamas vanduo, kad būtų išvengta rekristalizacijos.

6.4. Apskaičiavimas

6.4.1. Emulsijos (6.2.1) formaldehido kiekis % (m/m) apskaičiuojamas pagal šią formulę: [formulė šaltinio tekste pateikta paveikslėliu – žr. e-tar.lt]

= .

6.4.2. Losjonų, šampūnų atveju formulė yra tokia:

=

čia: m – mėginio masė gramais (6.2.1), C – formaldehido koncentracija mg/100 ml, nustatyta iš kalibracinės kreivės (6.1).

III. Pakartojamumas

7. Jeigu formaldehido kiekis sudaro 0,05%, to paties mėginio dviejų lygiagrečių nustatymų rezultatų skirtumas turėtų neviršyti 0,001%.

8. Jeigu formaldehido kiekis sudaro 0,2%, to paties mėginio dviejų lygiagrečių nustatymų rezultatų skirtumas turėtų neviršyti 0,005%.

IV. „PRANCŪZIŠKOJO NĖRIMO“ INSTRUKCIJA

9. Reikalingi priedai

9.1. Viena medinė ritė: išorės skersmuo 5 cm, centre – 1,5 cm skersmens skylė. Kaip parodyta 1 ir 2 pav., įkalamos keturios plieninės vinys. Atstumas tarp vinių turi būti 1,8 cm, o nuo jų iki skylės – 0,5 cm.

9.2. Viena tvirta adata (tokia kaip nėrimo vašelis), kad būtų galima pinti kilpomis teflono vamzdelį,

9.3. 5 metrai 1,6 mm teflono vamzdelio, kurio vidinis skersmuo – 0,3 mm.

10. Darbo eiga

10.1. Pradedant „prancūziškąjį nėrimą“, teflono vamzdeliu turi būti apvejamas nuo ritės viršaus iki apačios per centrinę skylę (paliekant 10 cm vamzdžio kyšoti iš ritės apačios, kad grandinėlę būtų galima ištraukti nėrimo metu); tada vamzdelis apvejamas aplink keturias vinis iš eilės, kaip parodyta 3 pav.

10.2. „Prancūziškojo nėrimo“ viršus ir apačia apsaugomi metaliniais žiedais ir prispaudžiamais dangčiais; reikia pasistengti, kad priveržiant teflonas nebūtų sutraiškytas. Vamzdelis apvejamas apie kiekvieną vinį antrą kartą, o kilpos daromos taip: kabliuku apatinis vamzdelis pakeliamas virš viršutiniojo (4 pav.). Tai kartojama paeiliui ties kiekviena vinimi (1, 2, 3,4 prieš laikrodžio rodyklę), kol bus pasiekiamas 5 m ar kitas reikalingas nėrinio ilgis.

10.3. Paliekama 10 cm vamzdelio grandinėlei užbaigti. Vamzdelis veriamas per kiekvieną iš keturių kilpų ir švelniai patraukiama, tokiu būdu užbaigiant grandinėlę.

11. „Prancūziškąjį nėrinį“, pagamintą pokolonėlės reaktoriams, galima įsigyti rinkoje (Supelco).

1 pav. Ritės schema

2 pav.

3 pav. Pirmasis vamzdelis

4 pav. Antrasis vamzdelis (kilpa formuojama apatinį vamzdelį (ištisinė linija)

pakeliant virš viršutiniojo (punktyrinė linija)

5 pav.

1 – HPLC siurblys

2 – Įšvirkštimo vožtuvas

3 – Kolonėlė su prieškolonėle

4 – Reagento siurblys

5 – T formos detalė be nenaudingojo tūrio

5’ – T formos detalė (Vortex)

6-6’ – Elementas be nenaudingojo tūrio

7 – „Prancūziškasis nėrinys“

7’ – Reaktorius

8 – Trikaklė kolba su verdančiu vandeniu

9 – Kolbos kaitintuvas

10 – Aušiklis

11 – Nerūdijančio plieno šilumokaičio vamzdelis

11’ – Šilumokaitis

12 – UV matomojo jo spektro detektorius

13 – PCRS 520 pokolonėlės modulis

Eliuentas Reagentai

6 pav. Aparatas