2 priedas

I. BENDROSIOS NUOSTATOS

1. Šis metodas taikomas 8-chinolinolio ir bi(8-hidroksichinolino) sulfatui atpažinti ir jų kiekiui nustatyti.

2. 8-chinolinolio ir bi(8-hidroksichinolino) sulfato kiekis mėginyje, nustatomas šiuo metodu, yra išreiškiamas 8-chinolinolio masės procentais.

3. Atpažįstama plonasluoksnės chromatografijos būdu. Kompleksinis junginys, susidaręs reaguojant su Felingo tirpalu, nustatomas spektrofotometriniu metodu esant 410 nm bangos ilgiui.

4. Reagentai. Jie turi būti naudojami analiziškai gryni.

4.1. 8-chinolinolis.

4.2. Benzenas (dėl benzeno toksiškumo su juo reikia dirbti atsargiai).

4.3. Chloroformas.

4.4. Vandeninis natrio hidroksido tirpalas, 50% (m/m).

4.5. Vario sulfato pentahidratas.

4.6. Kalio natrio tartratas.

4.7. M vandenilio chloridas.

4.8. 0,5 M sieros rūgštis.

4.9. M natrio hidroksido tirpalas.

4.10. Etanolis.

4.11. Butan-1-olis.

4.12. Ledinė acto rūgštis.

4.13. 0,1 M vandenilio chloridas.

4.14. Celite 545 arba jo atitikmuo.

4.15. Etaloniniai tirpalai

4.15.1. 100 ml matavimo kolboje pasveriama 100 mg 8-chinolinolio (4.1). Ištirpinama nedideliame kiekyje sieros rūgšties (4.8) ir ja skiedžiama iki žymės.

4.15.2. 100 ml matavimo kolboje pasveriama 100 mg 8-chinolinolio (4.1). Ištirpinama etanolyje (4.10), juo skiedžiama iki žymės ir išmaišoma.

4.16. Felingo tirpalai

4.16.1. A tirpalas: 100 ml matavimo kolboje pasveriama 7 g vario sulfato pentahidrato (4.5). Ištirpinama nedideliame vandens kiekyje. Praskiedžiama iki žymės vandeniu ir išmaišoma.

4.16.2. B tirpalas: 100 ml matavimo kolboje pasveriama 35 g kalio natrio tartrato (4.6). Ištirpinama 50 ml vandens. Įpilama 20 ml natrio hidroksido (4.4). Iki žymės pripilama vandens ir išmaišoma. Prieš pat naudojimą į 100 ml matavimo kolbą pipete įpilama 10 ml

A tirpalo ir 10 ml B tirpalo. Pripilama iki žymės ir išmaišoma.

4.17. Eliuentai plonasluoksnei chromatografijai atlikti

4.17.1. Butan-1-olis (4.11), acto rūgštis (4.12) ir vanduo (80: 20: 20; t/t/t).

4.17.2. Chloroformas (4.13), acto rūgštis (4.12) (95: 5; t/t).

4.18. 2,6-dichlor-4-(chlorimino)cikloheksa-2,5-dienonas, 1 % (m/t) tirpalas etanolyje (4.10).

4.19. Natrio karbonatas, 1 % (m/t) vandeninis tirpalas.

4.20. Etanolis (4.10), 30 % (t/t) vandeninis tirpalas.

4.21. Dinatriodihidroetilendiamintetraacetatas, 5 % (m/t) vandeninis tirpalas.

4.22. Buferinis tirpalas, pH 7: vieno litro matavimo kolboje pasveriama 27 g bevandenio kalio dihidrofosfato ir 70 g dikalio hidrofosfato trihidrato. Pripilama iki žymės vandens.

4.23. Visiškai paruoštos naudoti plonasluoksnės plokštelės: 0,25 mm storio (pvz., Merck Kieselgel 60 arba ekvivalentiškos) prieš naudojant apipurškiamos 10 ml reagento (4.21) ir džiovinamos 800C temperatūroje.

5. Priemonės

5.1. 100 ml apvaliadugnė kolba šlifo kakleliu.

5.2. Matavimo kolbos.

5.3. Graduotos pipetės, 10 ir 5 ml.

5.4. Moro pipetės, 20, 15, 10 ir 5 ml.

5.5. Dalijamieji piltuvai, 100, 50 ir 25 ml.

5.6. Lankstytasis filtro popierius, 90 mm skersmens.

5.7. Sukamasis garintuvas.

5.8. Grįžtamasis kondensatorius su šlifo kakleliu.

5.9. Spektrofotometras.

5.10. Optinės kiuvetės, kurių optinio kelio ilgis 10 mm.

5.11. Maišyklės kaitinamoji plokštė.

5.12. Chromatografo stiklo kolonėlės matmenys: 160 mm ilgio, 8 mm skersmens, apatinis galas susiaurėjęs, užkemšamas stiklo vatos kamščiu, viršutiniame gale yra antvožas slėgiui palaikyti.

II. ATPAŽINIMAS

6. Darbo eiga

6.1. Skystų gaminių mėginiai

6.1.1. Mėginio pH yra nustatomas ties 7,5 ir ant iš anksto paruoštos silikagelio plonasluoksnės plokštelės (4.23) pradinės linijos užlašinama 10 ml.

6.1.2. 10 ml ir 30 ml etaloninio tirpalo (4.15.2) užlašinama ant dar dviejų pradinės linijos taškų, po to plokštelė veikiama vienu iš dviejų eliuentų (4.17).

6.1.3. Kai tirpiklio frontas pasislenka 150 mm, plokštelė džiovinama 110 oC temperatūroje (15 minučių). UV lempos šviesoje (366 nm) 8-chinolinolio dėmės fluorescuoja geltonai.

6.1.4. Plokštelė apipurškiama natrio karbonato tirpalu (4.19). Išdžiovinama ir apipurškiama 2,6-dichloro-4-(chloroimino)cikloheksa-2,5-dienono tirpalu (4.18). 8-chinolinolis matomas kaip mėlynas taškas.

6.2. Kietų gaminių arba kremų mėginiai

6.2.1. 1 g mėginio ištirpinama 5-iuose ml buferinio tirpalo (4.22). Po to 10 ml chloroformo (4.3) nuplaunama į dalijamąjį piltuvą ir suplakama. Atsiskyrus chloroformo sluoksniui, vandeninis sluoksnis dar du kartus ekstrahuojamas 10 ml chloroformo (4.3). Sumaišytas ir filtruotas chloroformo ekstraktas garinamas beveik iki sausumo 100 ml apvaliadugnėje kolboje (5.1) sukamuoju garintuvu (5.7). Likutis ištirpinamas 2 ml chloroformo (4.3), 10 ml ir 30 ml gauto tirpalo užlašinama ant plonasluoksnės plokštelės (4.23) silikagelio 6.1.1 punkte aprašytu būdu.

6.2.2. Ant plokštelės užlašinama 10 ml ir 30 ml etaloninio tirpalo (4.15.2) ir toliau tiriama 6.1.2 – 6.1.4 punktuose aprašytu būdu.

III. KIEKIO NUSTATYMAS

7. Darbo eiga

7.1. Skystų gaminių mėginiai

7.1.1. 100 ml apvaliadugnėje kolboje pasveriama 5 g mėginio. Įpilama 1 ml sieros rūgšties (4.8) ir mišinys garinamas beveik iki sausumo esant sumažintam slėgiui ir 500C temperatūrai.

7.1.2. Likutis ištirpinamas 20 ml šilto vandens. Perpilama į 100 ml matavimo kolbą. Tris kartus skalaujama 20 ml vandens. Pripilama vandens iki 100 ml ir išmaišoma.

7.1.3. Į 50 ml dalijamąjį piltuvą (5.5) pipete įpilama 5 ml šio tirpalo. Įpilama 10 ml Felingo tirpalo (4.16). Susidaręs 8-chinolinolio vario junginys (vario oksinas) ekstrahuojamas tris kartus, įpilant po 8 ml chloroformo (4.3).

7.1.4. Filtruojama ir chloroformo sluoksniai surenkami į 25 ml matavimo kolbą (5.2). Iki žymės pripilama chloroformo (4.3) ir išmaišoma. Geltono tirpalo optinis tankis matuojamas chloroformo atžvilgiu esant 410 nm bangos ilgiui.

7.2. Kietų gaminių arba kremų mėginiai

7.2.1. 100 ml apvaliadugnėje kolboje (4.1) pasveriama 0,500 g mėginio. Įpilama

30 ml benzeno (4.2) ir 20 ml vandenilio chlorido (4.7). Kolbos turinys maišant 30 minučių virinamas grįžtamuoju kondensatoriumi.

7.2.2. Kolbos turinys perpilamas į 100 ml dalijamąjį piltuvą (5.5). Nuskalaujama 5 ml 1N HCl (4.7). Vandens fazė perpilama į apvaliadugnę kolbą (5.1), benzeno fazė plaunama 5 ml vandenilio chlorido (4.7).

7.2.3. Jeigu atsiranda emulsijų, trukdančių tolesniam tyrimui, 0,500 g mėginio sumaišoma su 2 g Celite 545 (4.14), kad susidarytų lengvai slenkantys milteliai. Mišinys nedideliais kiekiais perpilamas į chromatografo stiklo kolonėlę (5.12).

7.2.4. Po kiekvieno papildymo kolonėlės įkrova suslegiama. Visą mišinį supylus į kolonėlę, tuoj pat eliuavuojama vandenilio chloridu (4.13) taip, kad 10 ml eliuato būtų gaunama per apytikriai 10 minučių (jeigu reikia, šis eliuavimas gali būti atliekamas esant nedideliam azoto slėgiui). Eliuavimo metu virš kolonėlės įkrovos visą laiką turi būti šiek tiek vandenilio chlorido. Pirmieji 10 ml eliuato toliau apdorojami pagal 7.2.5 punkto aprašymą.

7.2.5. Surinktos vandeninės fazės (7.2.2) arba eliuatas (7.2.3) yra garinami beveik iki sausumo sukamajame garintuve esant sumažintam slėgiui.

7.2.6. Likutis ištirpinamas 6 ml natrio hidroksido tirpalo (4.9). Įpilama 20 ml Felingo tirpalo (4.16) ir kolbos turinys perpilamas į 50 ml dalijamąjį piltuvą (5.5). Kolba skalaujama 8 ml chloroformo (4.3). Sumaišius chloroformo fazė filtruojama į 50 ml matavimo kolbą (5.2).

7.2.7. Ekstrahavimas kartojamas tris kartus su 8 ml chloroformo (4.3). Chloroformo fazės filtruojamos ir supilamos į 50 ml matavimo kolbą. Iki žymės pripilama chloroformo (4.3) ir išmaišoma. Geltono skysčio optinis tankis matuojamas chloroformo (4.3) atžvilgiu, esant 410 nm bangos ilgiui.

8. Standartinė kreivė: į keturias 100 ml apvaliadugnes kolbas (5.1), kuriose yra po

3 ml 30% vandeninio etanolio tirpalo (4.20), pipete įpilama 5, 10, 15 ir 20 ml porcijos etaloninio tirpalo (4.15.1), atitinkančios 5, 10, 15 ir 20 mg 8-chinolinolio. Toliau laikomasi 7.1 punkte aprašytos darbo eigos.

9. Apskaičiavimas

9.1. Skystų gaminių mėginiai: 8-chinolinolio kiekis (% (m/m) lygus x 100,

čia: a – 8-chinolinolio masė iš standartinės kreivės (8) miligramais; m – mėginio (7.2.1) masė miligramais.

9.2. Kietų gaminių arba kremų mėginiai: 8-chinolinolio kiekis (%m/m) lygus x 100,

čia: a – 8-chinolinolis iš standartinės kreivės (8) miligramais; m – mėginio (7.2.1) masė miligramais.

IV. PAKARTOJAMUMAS

10. Jeigu 8-chinolinolio kiekis sudaro apie 0,3%, dviejų lygiagrečių to paties mėginio nustatymų rezultatų skirtumas turėtų neviršyti absoliučios 0,02% vertės.