29 priedas

OKSIDACINIŲ DAŽIKLIŲ, ESANČIŲ PLAUKŲ DAŽUOSE, ATPAŽINIMAS IR PUSIAU KIEKYBINIS NUSTATYMAS

Seimo kanceliarijos suvestinė redakcija nuo None · oficialus tekstas e-tar.lt ↗

Lentelė: oficialiame tekste šis priedas yra lentelė, o atviruose duomenyse ji pateikta po vieną langelį eilutėje. Skaičius tikrinkite lentelėje e-tar.lt ↗.

Priedų galiojimas šiandien automatiškai netikrinamas. Tikrinkite e-tar.lt ↗.

I. bendrosios nuostatos

1. Šis metodas taikomas šioms medžiagoms, esančioms kremo arba skysčių pavidalo plaukų dažuose, atpažinti ir pusiau kiekybiškai nustatyti:

Medžiagos pavadinimas

Simbolis

Fenilendiaminai o- fenilendiaminas m- fenilendiaminas p- fenilendiaminas (V priedas)

OPD MPD PPD

Metilfenilendiaminai 4-metil-1,2-fenilendiaminas (toluen-3,4-diaminas) 4-metil-1,3-fenilendiaminas (toluen-2,4-diaminas) 2-metil-1,4-fenilendiaminas (toluen-2,5-diaminas)

OTD MTD PTD

Diaminofenoliai

2,4-diaminofenolis

DAP

Hidrochinonas

1,4 benzendiolis

a-naftolis

α-N

Pirogalolis

1,2,3-trihidroksibenzenas

Rezorcinolis

1,3-dihidroksibenzenas

2. Iš kremo arba skysčio pavidalo dažų oksidaciniai dažikliai ekstrahuojami 96% etanoliu, esant pH 10, ir atpažįstami vienmatės arba dvimatės plonasluoksnės chromatografijos metodu.

II. ATpažinimas

3. Atliekant pusiau kiekybinį šių medžiagų nustatymą, mėginių chromatograma keturiose ryškinimo sistemose yra palyginama su etaloninių medžiagų chromatogramomis, gautomis tuo pačiu metu kiek galima panašesnėmis sąlygomis.

4. Reagentai. Jie turi būti naudojami analiziškai gryni.

4.1. Etanolis, bevandenis.

4.2. Acetonas.

4.3. Etanolis, 96% (t/t).

4.4. Amoniako tirpalas, 25% (d = 0,91).

4.5. L (+) askorbo rūgštis.

4.6. Chloroformas.

4.7. Cikloheksanas.

4.8. Azotas, techninės kokybės.

4.9. Toluenas.

4.10. Benzenas.

4.11. n-butanolis.

4.12. 2-butanolis.

4.13. Fosfinato rūgštis, 50% (t/t) tirpalas.

4.14. Diazo reagentas:

4.14.1. 3-nitro-1-benzendiazonio chlorobenzensulfonatas (stabilioji druskos forma) kaip Red 2 JN – Francolor;

4.14.2. 2-chloro-4-nitro-1-benzendiazonio naftalenbenzoatas (stabilioji druskos forma) kaip NNCD reagentas – etalonas Nr. 74 150 FLUKA;

4.14.3. arba ekvivalentiškas.

4.15. Sidabro nitratas.

4.16. p-dimetilaminobenzaldehidas.

4.17. 2,5 – dimetilfenolis.

4.18. Geležies (III) chlorido heksahidratas.

4.19. Vandenilio chloridas, 10% (m/t) tirpalas.

4.20. Etaloninės medžiagos, nurodytos 1 punkte. Jeigu tai aminojunginiai, etalonine medžiaga turi būti arba hidrochloridas (mono- arba di-), arba laisvoji bazė.

4.21. Etaloniniai tirpalai 0,5% (m/t)

4.21.1. Paruošiami 0,5% (m/t) kiekvienos etaloninės medžiagos, nurodytos 4.20 punkte, tirpalai.

4.21.2. 10 ml matavimo kolboje pasveriama 50 mg ± 1 mg etaloninės medžiagos. Pridedama 5 ml 96% etanolio (4.3) ir 250 mg askorbo rūgšties (4.5).

4.21.3. Tirpalas šarminamas amoniako tirpalu (4.4), kol pH pasiekia 10 (tikrinama indikatoriniu popieriumi). Pripilama iki 10 ml 96% etanolio (4.3) ir sumaišoma.

4.21.4. Tirpalai gali būti laikomi savaitę vėsioje tamsioje vietoje.

4.21.5. Kartais, pridėjus askorbo rūgšties ir amoniako, gali iškristi nuosėdų. Tada prieš tyrimą leidžiama nusistovėti.

4.22. Judančiosios fazės tirpikliai

4.22.1. Acetonas (4.2), chloroformas (4.6), toluenas (4.9) (35: 25: 40 tūrio dalys).

4.22.2. Chloroformas (4.6), cikloheksanas (4.7), absoliutusis etanolis (4.3), 25% amoniakas (4.5) (80: 10: 10: 1 tūrio dalys).

4.22.3. Benzenas (4.10), 2-butanolis (4.12), vanduo (50: 25: 25 tūrio dalys). Gerai sumaišoma ir naudojama viršutinė fazė, atsiskyrusi kambario temperatūroje (20–25oC).

4.22.4. n-butanolis (4.12), chloroformas (4.6), reagentas M (4.22.4.1) (7: 70: 23 tūrio dalys). Kambario temperatūroje (20–25o C) kruopščiai atskiriama ir naudojama apatinė fazė.

4.22.4.1. M reagento paruošimas: amoniako tirpalas, 25% (t/t) (4.4) – 24 tūrio dalys; fosfinato rūgštis, 50% (4.13) – 1 tūrio dalis; vanduo – 75 tūrio dalys.

4.22.4.2. Tirpikliai, kuriuose yra amoniako, prieš pat naudojimą turi būti gerai suplakami.

4.23. Indikatoriniai purškalai

4.23.1. Diazo reagentas. Paruošiamas 5% (m/t) vandeninis pasirinkto reagento (4.14) tirpalas. Šis tirpalas ruošiamas šviežias.

4.23.2. Ehrlicho reagentas. 2 g p-diametilaminobenzaldehido (4.16) ištirpinama 100 ml 10% (m/t) vandenilio chlorido vandeniniame tirpale (4.19).

4.23.3. 2,5-dimetilfenolis – geležies(III) chlorido hekshidratas:

4.23.3.1. 1-as tirpalas: 1 g dimetilfenolio (4.17) ištirpinama 100 ml 96% etanolio (4.3);

4.23.3.2. 2-as tirpalas: 4 g geležies (III) chlorido heksahidrato (4.18) ištirpinama 100 ml 96% etanolio (4.3);

4.23.3.3. ryškinant šie tirpalai yra purškiami atskirai: pirma – 1-as tirpalas, po to – 2-as tirpalas.

4.23.4. Amoniakinis sidabro nitrato tirpalas. 25% amoniako (4.4) pilama į 5% (m/t) sidabro nitrato (4.15) vandeninį tirpalą, kol nuosėdos visiškai ištirpsta. Šis reagentas ruošiamas šviežias ir nelaikomas.

5. Priemonės

5.1. Įprasta laboratorijos įranga plonasluoksnei chromatografijai atlikti.

5.1.1. Plastikiniai arba stikliniai gaubtai, sukonstruoti taip, kad apdorojant dėmes ir jas džiovinant chromatografinė plokštelė būtų azote. Šios atsargos priemonės yra reikalingos, nes kai kurie dažikliai yra jautrūs oksidacijai.

5.1.2. Mikrošvirkštas, 10 ml, graduotas 0,2 ml padalomis, su kvadratine adata, arba, dar geriau, 50 ml daugkartinis dalytuvas, uždėtas ant stovo su laikikliu taip, kad plokštelė būtų azote.

5.1.3. Paruoštos naudoti plonasluoksnės silikagelio plokštelės, 0,25 mm storio, 20 x 20 cm dydžio (Macherey ir Nagel, Silica G-HR ant plastikinės atramos arba ekvivalentiškos).

5.2. Centrifuga, 4000 aps./min.

5.3. Centrifugos mėgintuvėliai, 10 ml su PTFE padengtais užsukamais dangteliais, arba jų atitikmuo.

6. Darbo eiga

6.1. Mėginių paruošimas

6.1.1. Pirmieji 2 arba 3 cm kremo, išspausti iš tūbelės, yra išmetami.

6.1.2. Toliau išvardytos medžiagos dedamos į centrifugos mėgintuvėlį (5.3), prieš tai įleidus azoto: 300 mg askorbo rūgšties su 3 g kremo arba 3 g homogenizuoto skysčio.

6.1.3. Lašinama 25% amoniako (4.4), kol pH pasiekia 10. Skiedžiama iki 10 ml 96% etanoliu (4.3).

6.1.4. Homogenizuojama azote (4.8), užkemšama ir 10 minučių centrifuguojama, esant 4000 aps./min.

6.1.5. Naudojamas viršuje esantis skystis.

6.2. Chromatografija

6.2.1. Lašinimas ant plokštelių

6.2.1.1. Azoto (4.8) atmosferoje chromatografinės plokštelės (5.1.3) devyniuose taškuose, esančiuose maždaug kas 1,5 cm išilgai linijos ir apie 1,5 cm nuo plokštelės krašto, užlašinama po 1 ml kiekvieno aukščiau apibūdinto etaloninio tirpalo.

6.2.1.2. Etaloninio tirpalo lašai yra išdėstomi taip:

PPD

DAP

PTD

OPD

OTD

MPD

MTD

a-N

Be to, atitinkamai 10 ir 11 taškuose užlašinama po 2 ml mėginių, gautų pagal 6.1 punktą.

6.2.1.3. Plokštelė laikoma azote (4.8) iki chromatografinės analizės pradžios.

6.2.2. Ryškinimas

6.2.2.1. Plokštelė dedama į kamerą, prieš tai ją prapūtus azotu (4.8), prisotintą vieno iš keturių tirpiklių (4.22), ir chromatografuojama kambario temperatūroje (20–25oC) tamsoje, kol tirpiklio frontas pajudės nuo pagrindinės linijos 15 cm.

6.2.2.2. Plokštelė išimama ir džiovinama azote (4.8) kambario temperatūroje.

6.2.3. Purškimas. Plokštelė nedelsiant apipurškiama vienu iš keturių tirpalų, apibrėžtų 4.23 punkte.

7. Palyginamos chromatografiniu metodu gautos bandinio ir etaloninių medžiagų Rf vertės ir spalva. Abejotiną atpažinimą kartais galima patvirtinti taikant žymėjimo metodą, pridėjus atitinkamo etaloninio tirpalo į mėginio ekstraktą.

8. 1 lentelėje pateikti kiekvienos medžiagos Rf vertės ir spalvos priklausomai nuo naudoto tirpiklio ir indikatoriaus pavyzdžiai. OPD yra tik labai silpnai matoma; kad būtų galima aiškiai atskirti nuo OTD, turi būti naudojamas tirpiklis (4.22.3).

III. Pusiau kiekybinis nustatymas

1 lentelė. Rf vertės ir spalvos, gaunamos tuoj pat po apipurškimo

Etalo-ninė medžia-ga 4.20

Judančiosios fazės tirpikliai

Indikatoriniai purškalai

Rf vertės

Gautos spalvos

4.22.1

4.22.2

4.22.3

4.22.4

Diazo 4.23.1

Ehrlicho 4.23.2

Dimetilfeno-lio 4.23.3

AgNO3 4.23.4

OPD

0,62

0,60

0,30

0,57

Šviesiai ruda

MPD

0,40

0,60

0,47

0,48

Violetinio atspalvio ruda (*)

Geltona

Šviesiai ruda

PPD

0,20

0,50

0,30

0,48

Ruda

Ryškiai raudona (*)

Violetinė

Pilka

OTD

0,60

0,53

0,60

Ruda (*)

Šviesiai oranžinė

Šviesiai ruda

Pilko atspalvio ruda

MTD

0,40

0,67

0,45

0,60

Raudono atspalvio ruda (*)

Geltona

Ruda

Juoda

PTD

0,33

0,65

0,37

0,70

Ruda

Oranžinė

Violetinė (*)

Pilka

DAP

0,07

0,05

Ruda (*)

Oranžinė

Violetinė

Ruda

0,50

0,35

0,80

0,20

Oranžinė

Violetinė

Juoda (*)

α-N

0,90

0,80

0,90

0,75

Oranžinio atspalvio ruda

Violetinė (*)

Juoda

0,37

0,67

0,05

Ruda

Labai šviesiai violetinė

Labai šviesiai ruda

Ruda (*)

0,50

0,37

0,80

0,17

Oranžinė (*)

Blyškiai violetinė

Labai šviesiai ruda

Šviesiai ruda

(*) rodo aiškiausiai išryškėjusią spalvą.

9. Vizualiai palyginamas kiekvienos medžiagos, atpažintos pagal 7, 8 punktus, dėmių ryškumas su etaloninių medžiagų, kurių koncentracijos yra tinkamose ribose, dėmių ryškumu. Jeigu yra nustatoma, kad vienos arba kelių medžiagų koncentracija mėginyje yra perteklinė, mėginio ekstraktas skiedžiamas ir tyrimas kartojamas.

IV. TYRIMAS, NAUDOJANT DVIMATĖS PLONASLUOKSNĖS CHROMATOGRAFIJOS METODĄ

10. Atliekant dvimatę chromatografinę analizę, reikia naudoti papildomas etalonines medžiagas ir reagentus.

11. Papildomi etaloniniai tirpalai ir medžiagos

11.1. b-naftolis (b-N).

11.2. 2-aminofenolis (OAP).

11.3. 3-aminofenolis (MAP).

11.4. 4-aminofenolis (PAP).

11.5. 2-nitro-1,4-fenilendiaminas (2-NPPD).

11.6. 4-nitro-1,2-fenilendiaminas (4-NOPD).

12. Paruošiamas kiekvienos papildomos etaloninės medžiagos 0,5% m/t tirpalas, kaip apibūdinta 4.21 punkte.

13. Papildomas judančiosios fazės tirpiklis – etilacetatas/cikloheksanas/amoniako tirpalas, 25% (65: 30: 0,5 tūrio dalys).

14. Papildoma indikacinė sistema: stiklinis indas įdedamas į plonasluoksnės chromatografijos ryškinimo kamerą, įberiama 2 g kristalinio jodo ir kamera uždaroma tinkamu dangčiu.

15. Chromatografavimas

15.1. Ant plonasluoksnės plokštelės (5.1.3) absorbento paviršiaus nubrėžiamos dvi linijos, kaip parodyta 1 pav.

15.2. Azoto atmosferoje (5.1.1) pagrindiniame 1 taške (1 pav.), kuris yra 2 cm atstumu nuo abiejų kraštų, užlašinama 1–4 ml ekstrakto (6.1). Ekstrakto kiekis priklauso nuo dėmių chromatogramose (6.2) intensyvumo.

15.3. 2 ir 3 taškuose (1 pav.) užlašinama oksidacinių dažiklių, atpažintų arba laikomų atpažintais pagal 6.2 punktą (atstumas tarp taškų 1,5 cm). Užlašinama 2 ml kiekvieno etaloninio tirpalo, išskyrus DAP, kurio užlašinama 6 ml. Darbas atliekamas azote (15.2).

15.4. Veiksmai, nurodyti 15.3 punkte, yra pakartojami pagrindiniuose 4 ir 5 taškuose (1 pav.), plokštelė laikoma azote, kol atliekama chromatografija (atstumas tarp taškų – 1,5 cm).

15.5. Chromatografo kamera prapučiama azotu (4.8) ir įpilama reikiamas kiekis judančiosios fazės tirpiklio (4.22.2). Plokštelė (15.4) dedama į kamerą ir ryškinama tamsoje pirmojo eliuavimo kryptimi (1 pav.). Eliuavimas atliekamas tol, kol tirpiklio frontas pasiekia ant plokštelės pažymėtą liniją (apytikriai 13 cm).

15.6. Plokštelė išimama iš kameros ir dedama į chromatografo kamerą, prieš tai ją prapūtus azotu, kad išgaruotų eliuavimo tirpiklis, ne trumpiau kaip 60 min.

15.7. Reikiamas kiekis eliuento (13.2) iš graduoto mėgintuvėlio įpilamas į azotu (4.8) apdorotą kamerą, plokštelė, pasukus ją 90˚ kampu, dedama į kamerą (15.6), chromatografija atliekama antrąja kryptimi (taip pat tamsoje), kol tirpiklio frontas pasieks liniją, nubrėžtą ant absorbento paviršiaus. Plokštelė išimama iš kameros, o eliuentas išgarinamas ore.

15.8. Plokštelė 10 min. dedama į chromatografo kamerą, pripildytą jodo garų (14.3), ir dviejų krypčių chromatogramos duomenys yra nustatomi remiantis etaloninių medžiagų, kurių chromatografija buvo atliekama tuo pačiu metu, Rf ir spalvų vertėmis (2 lentelėje nurodytos Rf vertės ir spalvos). Ryškiausia dėmių spalva gaunama išryškintą chromatogramą paliekant ore pusę valandos po ryškinimo.

15.9. Oksidacinių dažiklių, nustatytų pagal 15.8 punktą, buvimą galima patvirtinti pakartojant veiksmus, apibūdintus 15.1–15.8 punktuose, ir 1 pagrindiniame taške papildomai užlašinant 15.2 punkte nurodytą ekstrakto kiekį – 1 ml etaloninės medžiagos, nurodytos 15.8 punkte. Jeigu, lyginant su chromatograma, gauta pagal 15.8 punktą, neatsiranda kitų dėmių, chromatogramos, gautos pagal 15.8, duomenų aiškinimas yra teisingas.

2 lentelė. Etaloninių medžiagų spalva, atlikus jų chromatografiją ir ryškinimą jodo garais

Etaloninės medžiagos simbolis

Spalva po ryškinimo jodo garais

Smėlio spalvos

Ruda

a-N

Violetinė

b-N

Šviesiai ruda

Violetinio atspalvio ruda

MPD

Gelsvai ruda

PPD

Violetinio atspalvio ruda

MTD

Tamsiai ruda

PTD

Gelsvai ruda

DAP

Tamsiai ruda

OAP

Oranžinė

MAP

Gelsvai ruda

PAP

Violetinio atspalvio ruda

2-NPPD

Ruda

4-NOPD

Oranžinė

1 pav.